В пособии представлены современные методы, применяемые в иммунологии и в самых разных областях биологии и медицины. Наряду с классическими методами выделения клеток иммунной системы, изучения их функциональной активности подробно освещены методы иммуноанализа, исследования экспрессии генов методом ПЦР, микрочипов, направленный мутагенез, гибридомная биотехнология и др. Представлен комплексный подход к оценке системы цитокинов - одной из важных регуляторных систем организма. Приведены основные принципы и этапы постановки методов, часть которых может быть воспроизведена в рамках практических занятий. Пособие хорошо иллюстрировано. Предназначено студентам врачебных и биологических специальностей медицинских вузов и университетов, а также ординаторам, аспирантам, врачам всех специальностей, специалистам, работающим в разных областях биологии и медицины. Издание рекомендовано для использования в преподавании в медицинских вузах Проблемной учебно-методической комиссией по иммунологии и аллергологии. Рекомендовано в печать Центральным координационно-методическим советом РГМУ.
Введение
Глава 1. Объекты исследования в иммунологии
1.1. Инбредные животные
1.2. Линии мышей с генетическими дефектами, затрагивающими иммунную систему
1.3. Линии мышей с аутоиммунной патологией
1.4. Биологические материалы для исследований
1.5. Методические особенности работы с иммунокомпетентными клетками
Глава 2. Методы разделения клеток периферической крови
2.1. Выделение лейкоцитов
2.2. Выделение мононуклеарных клеток
2.3. Выделение моноцитов
2.4. Выделение нейтрофилов
2.5. Аналитическая и препаративная цитофлуориметрия.
2.6. Иммуномагнитная сепарация клеток
Глава 3. Методы изучения функциональной активности клеток иммунной системы in vitro и in vivo
3.1. Оценка пролиферативной активности лимфоцитов
3.2. Оценка клеточной цитотоксичности
3.3. Оценка функциональной активности фагоцитов
3.5. Культура клеток in vivo
Глава 4. Иммуноанализы .
4.1. Методы определения преципитатов антител с антигенами в геле
4.2. Иммуноферментный и радиоиммунный анализы
4.3. Чувствительность, специфичность, диагностическая эффективность тест-систем иммуноанализов
4.4. Определение количества клеток, секретирующих тот или иной продукт, - метод ELISPOT
4.5. Методы исследования внутриклеточных цитоплазматических и ядерных белков - факторов
транскрипции, сигнальных молекул и других
Глава 5. Гибридомная технология. Моноклональные антитела
Глава 6. Генетические методы исследования в иммунологии
6.1. Полимеразная цепная реакция
6.2. Исследование экспрессии генов методом микрочипов
6.3. Получение мышей с нокаутом (knock-out) и нокином
(knockin) генов - метод направленного мутагенеза
6.4. Применение регуляторных микро-РНК в иммунологических исследованиях
Глава 7. Методы оценки системы цитокинов
Литература